石蜡切片的制作方法石蜡切片的制作过程-爱华网

 
制作石蜡切片标本的主要过程如下：
（1）取材与固定：大鼠断头处死，迅速摘取1.0×1.0×0.2厘米的大鼠心、肝、肾、股四头肌等小长条组织块，放入固定液中直接固定24h，4℃冰箱保存。
（2）冲洗：固定以后，须在自来水下流水冲洗10分钟。
（3）脱水：材料需要切成薄片以石蜡包埋。为使石蜡能透入材料内部，必须除去其内部的水分。这种除去材料内部水分的操作过程，称为脱水。脱水通常用梯度酒精，必须渐进，不能急骤，否则会引起材料不均匀的收缩。脱水时常用70%、80%、90%、95%、100%各级酒精。每级10-30分钟。
（4）透明：此时材料内部浸满酒精，石蜡仍难渗入，必须用既能与酒精混合又能溶解石蜡的媒浸剂浸渍，常用二甲苯。每次20-30分钟，进行2次，时间不能长，久浸会使材料变脆，造成切片困难。
（5）浸蜡：指石蜡浸入材料内部的操作过程。将溶解的石蜡倒入浸蜡杯内，将透明好的组织块放入，中间换二次石蜡，每次20-30分钟，注意温箱温度调到与石蜡熔点相同，如温度过高，包埋物变得硬脆而不易切片。
（6）包埋：将材料包埋在石蜡中以便切片。将熔化的石蜡倒入包埋器中，用热镊子把材料迅速移入包埋器中，并摆好位置，切记观察面向下摆放。之后，将包埋器移入水面，缓慢浸入水中。等石蜡完全凝结以后，从水中取出，并注明包埋块的名称、组别和日期等。
（7）切片：将材料连同周围的石蜡用解剖刀修切成梯形，四周离组织1-2毫米，前端离材料宜近。用少许石蜡将蜡块固定在木块上，然后将木块固定在切片机上，并调节切片刀固定器或材料固定器，使切片刀与蜡块靠近。调节切片厚度为7-10微米，进行切片，并将切片用毛笔移在铺有黑纸的盘中。
（8）展片与贴片：将切好的蜡带，放入温度为40-50℃的水浴锅内，依靠蜡的溶化与水面的张力，展平组织切片。取一小滴蛋白甘油（或多聚赖氨酸或直接用经过硅烷化处理过的载玻片）涂在载玻片上，用小拇指外侧把它涂成薄层，涂抹面积要超过蜡带所占面积，涂抹得越薄、越均匀越好。用解剖针把蜡带拖置载玻片上，注意摆放位置，玻片45-50℃烘干。
（9）脱腊：把玻片放入盛有二甲苯的染缸中溶去石蜡（3分钟），再经第二缸（3分钟）。
（10）下水：经100 %—95 %—90 %—80 %—70 %各级酒精后入蒸馏水。
（11）染色：用H.E染色法，操作步骤如下：入苏木精染液10分钟，至细胞核为紫红色，再用自来水流水洗至细胞核为鲜亮的蓝色。若过染，可用盐酸酒精分色。
（12）脱水：经70%—80%—90%—95%各级酒精，每级1～5分钟。复染：入伊红染液（用酒精配制）30秒至1分钟，再用95%的酒精分色，时间酌定。伊红主要染细胞质，着色浓淡应与苏木精染细胞核的浓淡相配合，如细胞质染得浓，细胞核也应浓染，要求对比明显。反之如细胞核染得浅，细胞质也应淡染。染色好的切片应该是细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色，细胞质被伊红染成桃红色，红蓝相映色彩鲜明，对比明显。
（13）透明：入二甲苯中3分钟至透明。
（14）封片：滴加一小滴加拿大树脂并用盖玻片小心封片，自然风干。
（15）实验观察与拍照：切片制作完成后可直接在光学显微镜下观察各器官的组织结构并拍照。
A.FAA固定液，50010酒精、福尔马林、冰醋酸，体积比为90mL:5mL:5mLe
B.脱水，酒精脱水，过程如下:70%--80%--90%--100'/o--100%(每级半小时)。
C.透明，用二甲苯透明，过程如下:3/4纯酒精+1/4二甲苯--1/2纯酒精+1/2二甲苯--1/4
纯酒精+3/4二甲苯，纯二甲苯--纯二甲苯(每级半小时).
D.渗蜡，56口石蜡，在二甲苯中加浮蜡后放入40口温箱过夜。第二天按以下顺序在温箱
中换纯蜡:1/3纯蜡+2/3二甲苯*1/2纯蜡+1/2二甲苯一2/3纯蜡+1/3二甲苯*纯蜡
，纯蜡(每级半小时)。
E.用1.5-2cm3纸盒包埋渗好蜡的材料，摆好位置。
F.在AO旋转切片机上将材料切成lo微米的连续切片。
G.粘片和烫片，在干净的载玻片上涂粘片剂(1: 1的蛋白质与甘油)，加水2. 3滴，将
检查过的蜡带放置其上，并将载玻片移至烫片箱上，温度为40口左右。
H.干片，40口烘箱烘千2天。
I.脱蜡，二甲苯脱蜡，过程如下:纯二甲苯--1/2二甲苯+1/2无水酒精--无水酒精(每
级3一5分钟)。
J.染色，1%番红，0.5%固绿染色，过程如下:100%酒精-- 95%酒精--85%酒精
--70%酒精--50%-->之前的全是处理2分钟1%番红-处理1天-0.5%固绿-处理5秒-脱水
K.脱水，各级酒精脱水，过程如下:50 酒精--70%酒精--85%酒精--95%酒精--2次100%酒精每步处理2分钟
L.透明，用二甲苯透明，过程如下:1/4二甲苯十3/4纯酒精--1/2二甲苯+l/2纯酒精
--纯二甲苯--2次每步处理5分钟
M.封片与干燥，用加拿大胶封片，40口烘箱烤片干燥。
N. Olympu:万能显微镜观察、拍摄。