爱华网国标优化：牛奶中左旋咪唑残留量的测定 GB29681-2013
(参考GB 29681-2013食品安全国家标准 牛奶中左旋咪唑残留量的测定高效液相色谱法)
左旋咪唑主要用于治疗畜禽胃肠道线虫、肺线虫病和猪肾虫病，在畜牧业中广泛应用。不合理地使用左旋咪唑会造成动物产品中残留，残留的左旋咪唑对人体的主要潜在危害是致畸作用和致突变作用。
方法优势
迪马科技建立牛奶中左旋咪唑解决方案，对比《GB 29681-2013 食品安全国家标准牛奶中左旋咪唑残留量的测定高效液相色谱法》，本方案：
1.简化前处理步骤，避免出现乳化现：采用10g/L三氯乙酸、三氯甲烷作为提取液，取代碳酸盐饱和溶液和乙酸乙酯完成左旋咪唑提取，避免了牛奶和乙酸乙酯会出现乳化现象的问题；
2.优异的回收率结果：采用ProElutPXC固相萃取柱，氨水甲醇洗脱，减少杂质的干扰，回收率达80%以上，保证实验结果的准确性、重现性；
3.本方案定量限为5 μg/kg，与国标方法《GB29681-2013 食品安全国家标准 牛奶中左旋咪唑残留量的测定 高效液相色谱法》 一致，可供广大分析工作者使用。
以下为详细解决方案，敬请参考！
1、适用范围
适用于牛奶中左旋咪唑的检测，方法定量限是5.0 μg /kg。
2、提取
(1) 取5.0 mL样品与5 mL三氯甲烷、1 mL乙酸铅（200 g/L）、10 mL三氯乙酸（10 g/L）混合，振荡2min，8000 rpm下离心2 min，收集上清液；
(2) 将下层残留物用10 mL三氯乙酸（10 g/L）、1 mL乙酸铅（200g/L）按照步骤(1)重复提取一次，合并两次上清液，待净化。
3、净化—ProElut PXC 150 mg/6mL（Cat.#68204）
a活 化： | 5 mL甲醇、5 mL水； |
b上 样： | 加入待净化液，弃去流出液； |
c淋 洗： | 依次加入3 mL水，3 mL氨水甲醇溶液*，弃去流出液； |
d洗 脱： | 加入8 mL 5%氨水甲醇，收集流出液； |
e重新溶解： | 将洗脱液在40 ℃下减压蒸馏近干，用流动相溶液定容至1 mL，供HPLC分析。 |
*氨水甲醇溶液：5%氨水―甲醇（80：20，V/V）
4、色谱条件
色谱柱：Diamonsil C18(2), 150 mm × 4.6 mm, 5 μm（Cat#99601）
流 速：1.0mL/min
进样量：20 μL
柱 温：30 ℃
检测器：UV 220 nm
流动相： 0.02 mol/L磷酸二氢钠二乙胺缓冲溶液*：甲醇= 50：50
*0.02mol/L磷酸二氢钠二乙胺缓冲溶液：取磷酸二氢钠2.44 g，加水850 mL溶解，加二乙胺3mL混合，用10%磷酸调pH至7.5，用水稀释至1000 mL。
5、添加回收结果
牛奶中左旋咪唑的HPLC检测添加回收结果
分析物 | 添加水平(mg/kg) | 回收率(%) |
左旋咪唑 | 0.10 | 84.36 |
左旋咪唑 | 0.02 | 94.57 |
左旋咪唑标准(0.5 mg/L)液相色谱图
左旋咪唑标准(0.10 mg/L)液相色谱图
添加水平为0.10 mg/kg 牛奶中左旋咪唑检测的液相色谱图
添加水平为0.02 mg/kg牛奶中左旋咪唑检测的液相色谱图
牛奶中左旋咪唑检测(空白样品)的液相色谱图
牛奶中左旋咪唑残留量的测定相关产品信息：
货号 | 名称 | 规格 |
样品前处理 | ||
68204 | 混合型阳离子交换反相固相萃取柱 ProElut PXC | 150 mg/6 mL, 30/pk |
244358 | 12管防交叉污染真空SPE萃取装置 | 12位 |
4803 | 1,3,6 mL柱管通用连接器 | 15/pk |
4806 | 考克(控制流量) | 15/pk |
99011 | 真空/正压两用泵，无油 | 1/pk |
99013 | 抽滤瓶套装 (包括硅橡胶管2米,2L抽滤瓶及橡胶塞) | 1/pk |
37177 | 针头式过滤器 Nylon | 13 mm,0.22 μm 100/pk |
37180 | 针头式过滤器 Nylon | 13 mm,0.45 μm 100/pk |
色谱柱及保护柱 | ||
99601 | 反相高效液相色谱柱 DiamonsilC18(2) | 150 × 4.6 mm，5 μm |
6201 | EasyGuard C18 保护柱套装 | 10 × 4.0 1个柱套 + 2个柱芯 |
标准品 | ||
56-31742-250MG | 盐酸左旋咪唑[16595-80-5] | 250 mg |
HPLC溶剂Ÿ缓冲盐Ÿ离子对试剂 | ||
50102 | 甲醇 HPLC级 | 4 L |
50157 | 磷酸二氢钠 无水HPLC级 | 100 g |
50133 | 磷酸 HPLC级 | 50 mL |
通用色谱产品 | ||
52401B | 瓶架/蓝色 | 50 孔 |
52401A | 瓶架/白色 | 50孔 |
5323 | 样品瓶（棕色/螺纹） | 2 mL, 100/pk |
5325 | 样品瓶盖/含垫（已经组装） | 100/pk |
H80465 | HPLC 进样针 | 25 μL |
