当前的蛋白质去除技术 去除蛋白质的方法

原文来自"Recent Developments inHigh-Abundance Protein Removal Techinques" By Tim Wehr---LC/GC。翻译真是一件好难的事,现在终于可以松一口气了。

在鉴定疾病状态以及治疗状态的反映这些方面,蛋白生物标记物(protein biomarker)得到广泛的应用。但是,有效的蛋白标识物的数目是有限的,尽管在过去十年付出了很大的努力去寻找显著的生物标识物(novel biomarker),可是成功率还是非常低。生物标识物的发现研究一般用到血清和血浆,这是因为这些非常容易获得。而且,血液流动于所有的组织器官,能获得这些组织渗漏出来的蛋白,这些蛋白能标识到疾病导致的伤害。但是,发现这些低丰度蛋白标识物(low-abundance biomarker proteins)的过程常常会受到高丰度蛋白(high-abundance proteins 简称HAPs)的妨碍。血清血浆中蛋白的浓度横跨十一个数量级(span a concentration range of 11 orders ofmagnitude),其中里面20种最多的蛋白就占了总蛋白含量的97~99%。在mg/ml含量的蛋白杂质背景下去检测pg/ml的目标标识物是一个可怕的(formidable)分析挑战。

简易的净化(simplify)血清和血浆中的蛋白组方法主要是针对不同种类HAPs(specific members of the class of HAPs)进行。这是因为它们虽然数目不多,但是重量占了大多数。 清蛋白(Albumin),就占了蛋白组50~70%的重量,它们能被假亲和(pseudo-affinity)比如Cibacron Blue chromatography*(reactive blue agarose是一种机制不很明确的亲和填料,它与很多蛋白的结合如人血清白蛋白,糖蛋白等都是特异性的(针对于它不结合的蛋白而言),有是非特异性的(能够跟很多乱七八糟的蛋白结合),所以说他是pseudo-affinitychromatographic 。我想这东西应该与paraoxonase有亲和)除去。Immunoglobulin G,占蛋白组中8~26%,能通过亲和色谱被蛋白A和蛋白G柱子除去。但是不幸的是,除去以上一种或两种蛋白时,仍然会出现难以控制的分析问题。免疫亲和色谱被认为是出去HAPs的一个可行的方法,现在免疫去除技术已有几种产品商业化。这在之前“Sample Prep Perspective”一文中已有陈述,这里就简单描述一下。这篇文章的重点主要是集中在在之前评论后出现的产品。

一步分离的产品:

在过去三年,Agilent Technologies、Sigma Aldrich、Genway Biotech(TNND,全是美国公司,两个加州,一个密苏里州)针对人体血清和血浆中HAP的去除开发了许多免疫物质。这些东西都是为了达到一步去除的,根据不同的样品,能去除最多20中HAPs。这些产品对其他哺乳动物(mammals)的血清、血浆一样起效(show cross-reactivity)。

免疫净化联用系统(multiple affinity removal system,简称MARS):

Agilent Technologies 公司是将联用技术第一个商业化的。它是在聚合物(polymeric)的担体上结合了六种人体血清HAPs(serum albumin ,IgG,α-1-antitrypsin,haptoglobin,and IgA)的抗体。抗体通过Fc区域与聚合物结合,这样的连接能使蛋白与亲和键合点(provides easy access of protein to theaffinity binding sites)容易结合。MARS产品有色谱柱填料、萃取柱填料两种。据报道去除效率大于99%,肿瘤标记物(spiked tumor markers)的回收率为78%。在之后的产品线有加上了Human-7柱,它能去除之前的六种HAPS还加上纤维蛋白原(fibrinogen),Mouse-3柱,专为了去除murine albumin,immunoglobulin,transferring

ProteoPrep20 血浆免疫净化试剂盒(ProteoPrep20 plasma immunodepletion kit)

这套技术是来自Sigma-Aldrich的,它有20种人体血浆HAPS的抗体组成。抗体包括多克隆的IgGs,抗体由专有的单链联接链接到担体(support)上。这产品也是有色谱柱和萃取柱两种形式。它能一次性去除98%重量的血浆蛋白,当进行二次去除时就大于99%。对20种蛋白的平均去除率为99.3%。

Seppro基于Ig-Y的免疫净化产品(Seppro IgY-based immunodepletionproduct)

Genway Biotech 开发了一系列基于avian yolk(IgY)抗体的免疫产品。这些抗体主要通过在母鸡中注入纯化的人体HAP作为抗原得出的。IgY抗体产生于蛋黄中,生产中就通过键合这些蛋白抗体的亲和色谱柱来进行纯化。之后这些抗体就连接到交联聚合物组成的担体上。每种抗HAP的IgY组合后就是免疫净化试剂,根据组合的不同,它能去除6,12或者14种HAPs。这产品能以散装、萃取柱、色谱柱的形式销售。对比基于IgG的产品,IgY能提供更多的优势:首先,IgY抗体对HAPs有更好的亲和性;其次,IgY抗体的Fc区域不会对人体蛋白进行吸收。而这是与IgG抗体的Fc区域不同,他会与其他多余的蛋白结合。由于没有交联反应使得IgY更具专一性;还有的就是,目标蛋白能容易地通过IgYs,使得它的产品可以反复使用(multiple times);最后,由于鸟类与哺乳类之间进化的差距,IgYs比IgGs具有能广的适用性。这使得IgYs能用于其他哺乳类蛋白组比如老鼠、山羊。

ProteoSpinabundant serum protein depletion kit:

The Norgen Biotek Corp.(加拿大的公司)没有采用亲和技术,他们采用离子交换技术对HAP进行净化。

多步免疫净化产品(Multistep Immunodepletion Products):

除了高丰度的蛋白(HAPs),中等丰度的蛋白(MAPs)也会对低丰度的蛋白(LAPs)发生干扰。为此,Genway 通过把其IgY-12和IgY-14 HAP净化系统再结合上一支免疫净化柱子去除MAPs。这根柱子就叫SuperMix。

通过与Agilent 7- antibody和Genway IgY-14这些一步净化的产品比较,两步净化程序有更好的净化效率。

肽免疫亲和的蛋白质净化(Protein Depletion Using PeptideAffinity):

基于抗体产品免疫净化有两个不足之处:首先,洗脱的过程样品会被稀释;其次,当需要得到更多的其他目标蛋白组时,需要扩展免疫净化技术。解决方法之一就是利用结合了六肽(hexapeptides)色谱分离技术。这技术由加州的Bio-Rad 实验室开发,它在有效净化HAPs的同时克服了免疫净化的缺点。产品以萃取柱为主,对比基于抗体免疫的产品,100ul的填料体积能容纳超过1ml的样品,过量的HAPs直接通过,没有保留。样品上样、淋洗后用小于300ul的洗脱缓冲液进行洗脱。结果就是HAPs的去除和至少三倍浓度提高的LAPs,回收率为99.6%,去除率为96%。

结论:

当前已有许多的蛋白净化产品成功商业化,它们能大大简化蛋白标识物的净化任务。它们的大部分都是一步的基于抗体的免疫净化产品,能去除最多14种人体血清血浆中的高丰度蛋白。近来多步免疫净化产品还有肽亲和技术都有很好的潜力,它们都能很好地与拥有显著蛋白标识物的蛋白组结合(reachingthat segment of the proteome where noval biomarkers are hoped toreside)。



当前的蛋白质去除技术 去除蛋白质的方法

  

爱华网本文地址 » http://www.aihuau.com/a/25101017/337151.html

更多阅读

去手术疤痕的方法 疤痕手术哪家医院好

去手术疤痕的方法——简介手术疤痕是比较常见的,特别是以前的手术并没有十分重视手术疤痕这个问题。现在的医学技术是可以去除手术疤痕的,而且去除手术疤痕一般也需要医学方法。去手术疤痕的方法可以分为手术切除、植皮、药物、放射疗

什么眼霜去细纹好 去除眼部细纹的方法 眼部细纹去除最快方法

今天小编就教你几招,去除眼部细纹的方法看着眼角的细纹越来越深,是不是你也越来越发愁了,甚至连笑都不敢笑了。面对这样顽固的细纹,我们可不能就此泄气,就这样俯首称臣了。想要拥有年轻的面庞,我们就要愈挫愈勇。那么,怎样去除细纹呢?今

有效去除脸部红血丝的方法 有效去除红血丝的方法

有效去除脸部红血丝的方法——简介脸上红扑扑的像红苹果一样很是可爱,但是脸上的红如果是红血丝可就不好办了,去红血丝的方法有很多,但是本就皮肤敏感的MM们可不能随便拿脸当试验品,今天为大家带来了几种去红丝的有效方法,让你再也不用烦

快速洁白牙齿的方法 粉刺怎么去除小妙招

快速洁白牙齿的方法——简介最近很多朋友问我关于快速美白牙齿的方法,我把快速美白牙齿的方法共享出来,仅供参考。快速洁白牙齿的方法——工具/原料用柠檬汁方法如下:每晚在刷牙后,用纱布沾些柠檬汁,摩擦牙齿,牙齿就会变得洁白光亮。

去除痘印的方法 淡化痘印最有效的方法

去除痘印的方法——简介生活中处处都可以美容,哪怕是一杯隔夜茶,也可以让你的睫毛变长。一杯柠檬汁、一杯决明子茶都可以让你变漂亮,那么针对痘印,生活中又有那些妙招呢,赶紧来学学去除痘印的方法吧!去除痘印的方法——方法/步骤

声明:《当前的蛋白质去除技术 去除蛋白质的方法》为网友街头巷尾分享!如侵犯到您的合法权益请联系我们删除