爱华网遗传的基本物质是DNA，基因则是位于染色体上有遗传效应的DNA片段，下面我们一起来看看转基因动物的基因转移方法和应用。
转基因动物的基因转移方法和应用
哺乳类动物基因转移方法，是将改建后的目的基因（或基因组片段）用显微注射等方法注入实验动物的受精卵（或着床前的胚胎细胞），然后将此受精卵（或着床前的胚胎细胞）再植入受体动物的输卵管（或子宫）中，使其发育成携带有外源基因的转基因动物。
根据外源基因导入的方法和对象的不同，目前制作转基因动物的方法主要有显微注射法、反转录病毒法、胚胎干细胞（embryonicstemcell，ES细胞）法、电脉冲法、精子载体导入法等
显微注射法
是最常用且成功率较高的方法，以转基因小鼠的制作为例，大致过程如下。
一、采集受精卵
（1）超排卵：选取6～8周龄的雌性小鼠，先后腹腔注射5U孕马血清促性腺激素（pregnantmareserumgonactotropin，PMSG）和2.5～5.0U人绒毛膜促性腺激素（humarchorionicgonactotropin，HCG），以促进排卵，然后与鼠龄为12周～l年的雄性小鼠按1:1交配。交配成功的标志是在雌性小鼠的阴道口发现白色的阴道栓。
（2）取受精卵：与雄性小鼠合笼的次日上午，将确认有阴道栓的雌性小鼠用颈椎脱臼法剖杀，取出输卵管，置于培养液中，在体视显微镜下小心的切开输卵管膨大的壶腹部，用透明质酸酶溶液稍用力冲洗，使受精卵与输卵管分离，并流到培养液中，在体视显微镜下选择原核清晰的受精卵，移人装有培养液的胚胎培养皿中，然后在培养皿滴加矿物油使之覆盖在培养液表面，在CO2孵箱（37℃，5％CO2，95％空气）中培养5h左右（一般在上午10时左右取受精卵，培养至l3时可见雌、雄性原核，多数受精卵通常在13～18时之间原核形成并清晰可见）。
二、向受精卵雄性原核注入DNA溶液
受精卵中，有分别来自卵子和精子的两个原核，通常来自精子的雄性原核较大，能容纳更多的外源DNA，因此一般都是向雄性原核注入DNA溶液。另外，要导入的基因DNA还必须先用琼脂糖凝胶电泳法测定其纯度。将含有10～20个受精卵的培养液滴和DNA液滴共同滴放于载玻片上，然后固定在显微注射仪的载物台上，将视野中央调于DNA液滴上，右手持充满矿物油的玻璃吸管吸取DNA溶液，吸入量以DNA溶液和矿物油之问出现弯月形位置为准，然后再将视野中央移至
受精卵液滴上，左手控制持卵吸管，利用负压将受精卵固定，并将右手的吸管尖端移至固定了的受精卵上，继而插入受精卵雄性原核，将DNA溶液注人雄性原核中，为肯定是否已注入，须用肉眼确定雄性原核是否膨大。仅将未损坏的完成操作的卵收集起来，在37℃的CO2孵箱中培养过夜，第2天将发育成2细胞的卵挑选出来。
三、将2细胞的受精卵移植到假妊娠雌性小鼠的输卵管中
用结扎了输精管的雄性小鼠与发情期的雌性小鼠（一般选用ICR小鼠）进行交配，虽然不能引起受精，但可以刺激子宫颈管，使雌性小鼠体内的黄体活化，造成能继续妊娠的内分泌环境，这种小鼠称为假孕雌性小鼠。将经显微注射的2细胞受精卵移植至交配第3天的假孕母鼠输卵管中，仍可正常发育。操作时，最好是在两侧输卵管各移植l2个卵，这样，情况良好时可得8只仔鼠，有时仅能产生1只仔鼠，因为DNA注入而造成的损伤可使许多受精卵在中途停止发育。
四、导入基因的鉴定
通常，胚胎移植生育出的全部仔鼠中，约有20％～30％具有导入基因，因此要用SouthernBlot或PCR法对导入的遗传基因进行分析，以便挑选制作外源性基因导入成功的小鼠进行饲养和繁殖。
基因显微注射法的特点是外源基因的导入整合效率较高，不需载体，直接转移目的基因，目的基因的长度可达lOOkb（10万个碱基对）。它可直接获得纯系，所以实验周期短。但需要贵重精密仪器，技术操作难度大，并且外源基因的整合位点和整合的拷贝数都无法控制，易造成宿主动物基因组的插入突变，引起相应的性状改变，重则致死。
五、反转录病毒感染法
反转录病毒具有侵入宿主细胞并整合于细胞染色体DNA的能力。将外源基因DNA插入反转录病毒载体，通过辅助细胞包装成高感染度的病毒颗粒，感染胚胎后，将感染的桑椹期胚胎细胞导入子宫，可发育成携带外源基因的子代动物。
该法整合率较高，目的基因不易破坏，多是单拷贝、单位点整合，适合于难以观察到原核的禽类受精卵。由于病毒衣壳大小的限制，目的基因不宜超过10kb，否则影响活性和稳定。此外，病毒DNA可能影响外源基因在宿主动物的表达。
胚胎干细胞法
胚胎干细胞（ES细胞）是指从囊胚期的内细胞团中分离出来的尚未分化的胚胎细胞，具有发育全能性，能进行体外培养<扩增、转化和制作遗传突变型等遗传操作。本法以整合有外源基因的ES细胞作为供体细胞，大致过程如下：
（1）获取发育至一定时期的胚胎，经培养后，剥离和分散内细胞团，再培养，最后分离、扩散、鉴定ES细胞。
（2）通过基因打靶技术，将外源基因经逆转录病毒感染、电脉冲法等方法导入ES细胞，体外培养和筛选有外源基因表达者。
（3）获取囊胚期胚胎，作为ES细胞的移植受体。
（4）通过显微操作将ES细胞注入到囊胚期胚胎的腔内，使之与内细胞团紧靠在一起，成为嵌合体。
（5）将注射过的胚胎，经培养后筛选无发育缺损的囊胚，移植到交配第3天的假孕受体动物子宫内，培育出转基因动物。本法外源基因整合率高，植入囊胚前筛选合适的转化的ES细胞，克服了以前只能在子代选择的缺点，并能充分利用分子生物学发展起来的各种先进方法，是很有前途的技术。缺点是不易建立ES细胞系。并且由于通过嵌合体途径，所以实验周期长。
电脉冲法
电脉冲法（electroporation）又称电穿孔法，是将供体DNA与受体细胞充分混匀，在外界的高电压短脉冲下改变细胞膜结构，使细胞膜产生瞬间可逆性电穿孔，从而使一定大小的DNA可以通过细胞膜进入细胞，运送到细胞核。1980年，津墨缅（Zimmermann）等首先应用电脉冲技术把药物及染料导人小鼠胸腺细胞及红细胞，同年汪大键（T.K.Wang）和细基（Neumail）首先报道了用电脉冲法将TK基因导人CTK小鼠的CTK细胞，在106个处理细胞中得到了67个转化克隆：开创了外源基因的电脉冲方法。目前在动物中电脉冲法主要用来转化胚胎干细胞。
精子导入法
利用精子作为外源基因载体，借助受精作用把外源綦因导人受精卵，整合到受精卵的基因组中，称之为精子载体导入法，是构建转基因动物的一种新尝试。该法简单、方便，依靠生理受带过程，免去了对原核的损伤。但在实践中成功率较低，对精子是否可作为外源DNA的载体也存在争论。
